Статья опубликована на с. 28-31
Введение
Гормонально-неактивные аденомы гипофиза (НАГ) представляют собой аденомы гипофиза, протекающие без клинических проявлений гиперсекреции гипофизарных и периферических гормонов. Объединение всех этих отличающихся по этиологии процессов продиктовано тем, что они вызывают сходные клинические проявления и синдромы [1, 2].
В настоящее время развитие как НАГ, так и других аденом гипофиза связывается с моноклональными соматическими мутациями. В качестве факторов инициации клеточной трансформации предполагается влияние гормонов гипоталамуса и нейротрансмиттеров [3, 4]. Многие гормонально-неактивные аденомы гипофиза, которые клинически себя не проявляют гиперпродукцией какого-либо гормона, на самом деле могут продуцировать гликопротеидные гормоны (гонадотропины, α-субъединица гликопротеидных гормонов), выявляемые при иммуногистохимическом исследовании удаленной опухоли. Характер роста НАГ варьирует от весьма медленного, замершего на стадии микроаденомы, до бурного, с быстрым прогрессированием гипофизарной недостаточности и неврологической симптоматикой [5, 6].
На долю НАГ приходится 25 % всех аденом гипофиза (самая частая аденома гипофиза); среди опухолей с супраселлярной локализацией 70 % всех аденом — гормонально-неактивные аденомы гипофиза [2, 3]. По аутопсийным данным, распространенность микроинциденталом гипофиза достигает 10–25 %. Частота новых случаев клинически значимых гормонально-неактивных аденом гипофиза ориентировочно составляет 6 на 1 млн населения в год [10].
Генетическая детерминация нейроэндокринных заболеваний, являющихся причиной наследственной предрасположенности к НАГ и его клиническим манифестациям, подтверждается результатами популяционных и генетических исследований. Однако надежные и доступные методы молекулярно-генетической стратификации риска развития НАГ в клинической нейроэндокринологической практике в настоящее время не разработаны и нуждаются в целенаправленном хорошо спланированном изучении [7, 8].
В последние годы появились работы по исследованию взаимосвязи полиморфизмов генов eNOS с поражением органов-мишеней [9, 10]. Установлено, что NO, экспрессия которого контролируется NO-синтазами, играет важную роль в эндотелийзависимой вазодилатации и при многих патологических состояниях обнаруживается дисциркуляторная энцефалопатия. В связи с этим интерес исследователей привлекает структурная организация гена NO-синтазы. Мутация в данном гене теоретически может быть одной из детерминант НАГ и его осложнений [11].
В фундаментальных исследованиях установлено, что уровень активности факторов ангиогенеза (ЭТ-1, VEGF, VEGFR-2) во многом определяется степенью активности eNOS, концентрацией в системном кровотоке факторов апоптоза — цитохрома С и р53 [12].
Цель исследования — изучить показатели, характеризующие состояние процессов апоптоза (цитохром С, р53) и ангиогенеза (ЭТ-1, VEGF, VEGFR-2), активность eNOS у больных с неотягощенным семейным анамнезом НАГ.
Материал и методы исследования
В исследование включен 71 больной НАГ с интраселлярной микроаденомой (размер опухоли до 10 мм). Пациенты были в возрасте от 18 до 70 лет (средний возраст 44,50 ± 3,85 года). Наибольшее число больных с НАГ приходится на возраст от 35 (23,9 %) до 40 (25,4 %) лет и в меньшей степени — до 30 (18,3 %) и свыше 55 (5,6 %) лет. При этом несколько преобладали женщины — 41 (57,7 %) случай. Биохимические исследования крови проводили не только у больных с НАГ, но и у здоровых лиц (конт-рольная группа) — 20 добровольцев (10 мужчин и 10 женщин), давших информативное согласие на проведение исследований. Средний возраст пациентов контрольной группы составил 43,6 ± 4,5 года.
Согласно поставленной цели и задачам исследования больные с НАГ были разделены на две альтернативные группы: первая группа — 50 (70,4 %) пациентов без отягощенного семейного анамнеза и вторая группа — 21 (29,6 %) больной с отягощенным семейным анамнезом, в том числе с панмиксией — 9 (2,7 %) и инбридингом — 12 (16,9 %).
В табл. 1 приведено распределение больных по полу и группам.
Диагноз НАГ верифицировали на основании тщательно собранного анамнеза, изучения динамики течения заболевания, результатов магнитно-резонансной томографии (МРТ), а также определения в сыворотке крови содержания гипофизарных гормонов: пролактина (ПРЛ), лютеинизирующего (ЛГ), фолликулостимулирующего (ФСГ), соматотропного (СТГ), адренокортикотропного (АКТГ) и тиреотропного гормона (ТТГ). Концентрацию ПРЛ, ЛГ, ФСГ, СТГ, АКТГ и ТТГ определяли в сыворотке крови на твердофазном иммуноферментном анализаторе.
Одновременно в сыворотке крови проводили оценку генетического полиморфизма еNOS. Геномную ДНК из венозной крови обследованных больных выделяли с помощью хлороформной экстракции. В работе использовали термостабильную ДНК-полимеразу Taq и рестриктазу Ncol, полученную из НПО «Биотех» (Москва), рестриктазу Bst DEJ — из НПО «Сибэнзим» (Новосибирск), олигонуклеидные праймеры — из НПО «Сипол» (Москва).
МРТ-параметры изучали на приборе Siemens-1,5T (Германия).
Статистический анализ проведен в программной среде Microsoft Windows с использованием пакетов программ Microsoft Excel 2003 и Statistica version 6.0, 2003. Полученные данные отражены в виде М ± m, где М — среднее значение вариационного ряда, m — стандартная ошибка среднего значения. Достоверность различий между независимыми выборками определялась по методу Манна — Уитни и Стьюдента, в оценке динамики в парных рядах использован критерий Вилкоксона. Критерий t Стьюдента вычисляли с использованием формулы:
где M — среднее, m — стандартная ошибка среднего. Полученную величину выверяли по таблице Стьюдента и определяли критерий достоверности. Достоверность различий между средними принимали при р < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
В наблюдениях установлено, что снижение eNOS на 15,3 % (р < 0,05), повышение ЭТ-1 на 8,3 % (р > 0,05), VEGF — на 11,6 % (р > 0,05), VEGFR-2 — на 7,6 % (р > 0,05), цитохрома С — на 9,6 % (р > 0,05), р53 — на 4,2 % (р > 0,1) у 9 больных с микроаденомой (размером до 10 мм) и неотягощенным семейным анамнезом НАГ коррелировали с такими симптомами заболевания, как половые нарушения, головные боли, вегетативные кризы. С увеличением размеров опухоли у 11 больных эта связь усиливалась. У трех пациентов с макроаденомами (> 10 мм), несмотря на то что показатели маркеров ангиогенеза и апоптоза были нарушенными, клиническая симптоматика НАГ не проявлялась.
Вместе с тем не выявлена четкая закономерность между изменениями уровня активности маркеров дисфункции эндотелия, ангиогенеза и апоптоза и размерами опухолевого процесса у больных с неотягощенным семейным анамнезом НАГ. В то же время установлена четкая зависимость между нарастанием факторов дисфункции эндотелия, ангиогенеза и апоптоза и показателями клинического течения НАГ.
В проведенных исследованиях показано, что у больных с НАГ по сравнению с пациентами контрольной группы отмечается значимое повышение в плазме крови факторов регуляции процесса апоптоза: увеличение уровня проапоптотического белка р53 на 87,5 % (р < 0,001), активация на фоне депрессии базального уровня eNOS — на 25,1 % (р < 0,01) и отсутствие реакции факторов регуляции процессов ангиогенеза — фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и его растворимого рецептора VEGFR2, параметры которых практически не отличались от таковых в контроле — 3,8 и 4,6 % (р > 0,05).
Одновременно нами выявлена прямая слабая корреляционная связь между активностью eNOS и показателями VEGF (0,81; р < 0,001), VEGFR2 (0,85; р < 0,001) и р53 (0,80; р < 0,001). Обнаружена сильная связь между уровнем VEGF и показателями VEGFR-2 и р53 (0,87; р < 0,001 и 0,80; р < 0,001), VEGFR2 и р53 (0,77; р < 0,001) и практически полное отсутствие связи между показателем р53 и уровнем eNOS (0,13; р > 0,5).
Полученные данные свидетельствуют о том, что у больных с НАГ в отличие от контроля показатели связи eNOS с VEGFR2 меняют положительный знак на отрицательный. В контроле эта связь отсутствует, а у пациентов с НАГ она сильна. В контроле также отсутствует связь между VEGF, р53 и VEGFR-2, а у исследованных больных она оказалась сильной.
Таким образом, можно заключить, что у пациентов с НАГ отмечается дисрегуляция продукции NO, так как угнетается активность eNOS. Снижение активности eNOS не зависит от изменяющихся величин VEGF, VEGFR-2, поскольку нами выявлена корреляция между этими показателями. Вместе с тем обращает на себя внимание тот факт, что у больных с НАГ повышение проапоптотического фактора р53 происходит на фоне сохранения высокой корреляционной связи eNOS с р53, который, по-видимому, тормозит прогрессирование опухолевого процесса у больных с НАГ.
Проведенные нами исследования не позволяют установить зависимость выявленных нарушений у больных с микроаденомой и макроаденомой от пола, длительности заболевания, наследственно-генетических признаков и т.д. Нет данных о связи этих показателей с клиническим течением, показателями гормональной активности гипофиза. Все это подчеркивает необходимость проведения дальнейших исследований в данном направлении.
Выводы
1. У больных с гормонально-неактивными аденомами гипофиза угнетается активность eNOS, что может лежать в основе дисфункции эндотелия.
2. Угнетение активности eNOS происходит на фоне активации про- и антиапоптотических факторов, повышения уровня р53, незначительных изменений факторов, регулирующих процессы ангиогенеза (VEGF, VEGFR-2).
3. Выявлено отсутствие корреляционной связи между снижением показателя активности фермента eNOS и показателями регуляции про- и антиапоптоза, ангиогенеза, что свидетельствует о независимости этих процессов в механизмах формирования гормонально-неактивных аденом гипофиза.
4. У больных с гормонально-неактивными аденомами гипофиза возрастает показатель корреляционной связи eNOS с VEGFR-2, что свидетельствует об усилении процессов торможения ангиогенеза и пролиферативной активности ткани.
5. Установлено наличие высокой связи параметров VEGF и VEGFR-2 с показателями содержания белка апоптоза р53, что свидетельствует об их важности в механизмах торможения опухолевого процесса. Это достигается, по-видимому, за счет сохранения в пределах контрольных значений регуляторов ангиогенеза VEGF и VEGFR-2 в плазме крови больных с гормонально-неактивными аденомами гипофиза.
6. Выявлено, что у пациентов с гормонально-неактивными аденомами гипофиза в плазме крови наблюдается дисбаланс в содержании факторов эндотелиальной функции (eNOS), ангиогенеза (VEGF и VEGFR-2), проапоптоза (р53). Эти данные свидетельствуют о важности их в механизмах формирования болезни и о необходимости учета для мониторинга, дифференциальной диагностики, прогноза и разработки тактики индивидуализированного лечения.
Список литературы
1. Астафьева Л.И., Марова Е.И., Кадашев Б.А. и др. Сравнительное исследование пролактинов и гормонально-неактивных аденом гипофиза с умеренной гиперпролактинемией // Пробл. эндокринол. — 2006. — № 3. — С. 30-33.
2. Кадашев Б.А. Аденомы гипофиза: клиника, диагностика, лечение / Под ред. проф. Б.А. Кадашева. — М.; Тверь: Триада-Х, 2007. — 368 с.
3. Надь Ю.Г. Особенности течения и клинических проявлений опухолей и инциденталом гипофиза, сопровождающихся гипо- или гиперпролактинемией // Вопр. онколог. — 2008. — № 6. — С. 734-738.
4. Пшенникова М.Г. Роль генетических особенностей организма в устойчивости к повреждающим воздействиям и в защитных эффектах адаптации // Пат. физиол. — 2011. — № 4. — С. 7-16.
5. Раевская Т.А., Гончарова С.А., Коновалова Н.П. и др. Влияние донора оксида азота, модулятора лекарственной устойчивости опухолей на гибель клеток и экспрессию белка р53 // Бюл. эксп. биол. и мед. — 2009. — № 4. — С. 401-403.
6. Симоненко В.Б., Дулин П.А., Маканич М.А. Нейроэндокринные опухоли: Руководство. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. — 240 с.
7. Тепляков А.Т., Шилов С.Н., Березикова Е.Н. и др. Полиморфизм генов eNOS и iNOS при хронической сердечной недостаточности у больных ишемической болезнью сердца // Кардиология. — 2010. — № 4. — С. 23-30.
8. Халимова З.Ю., Холова Д.Ш., Урманова Ю.М. и др. Изучение особенностей семейного наследования неактивных аденом гипофиза в Республике Узбекистан // Международный эндокринологический журнал. — 2013. — № 1 (49). — С. 33-41.
9. Чернова А.А., Никулина С.Ю., Шульман В.А. и др. Полиморфизм генов α2β-адренергического рецептора и эндотелиальной NO-синтазы в генезе наследственного синдрома слабости синусового узла // Кардиология. — 2011. — № 6. — С. 55-59.
10. Чехонин В.П., Шеин С.А., Корчагина А.А. и др. Роль VEGF в развитии неопластического ангиогенеза // Вестн. РАМН. — 2012. — № 2. — С. 23-33.
11. Чумаков П.М. Белок Р53 и его универсальные функции в многоклеточном организме // Успехи биол. химии. — 2007. — Т. 47. — С. 3-52.
12. Alexandr J.M., Bikkal B.M., Zervas N.T. Clinical nonfunctioning pituitary tumors are monoclonal in origin // J. Clin. Invest. — 2009. — Vol. 86, № 1. — P. 336-340.
/29.jpg)
/29_2.jpg)