Журнал «Здоровье ребенка» 2 (23) 2010

Введение

Сегодня в связи с повышением уровня заболеваний, обусловленных вирусами, и особенно гриппа, наблюдается увеличение числа исследований, направленных на изучение антивирусных свойств фармацевтических препаратов, которые используются как противовоспалительные средства [2, 6]. Одним из эффективных препаратов с антисептическим характером действия, которые широко используются в отоларингологии, является препарат местного применения Септолете плюс, состоящий из цетилпиридиния хлорида (антисептический компонент) и анестетика (бензокаин). Ранее было показано, что Септолете плюс не обладает депрессорным действием на состояние местного иммунитета, основанного на определении иммуноглобулинов, лактоферрина и цитокинов в ротоглоточном секрете больных острым фарингитом [8]. Известно, что одним из основных антивирусных механизмов является продукция ранних интерферонов — a - и b - и более позднего g -интерферона [5]. Эти интерфероны на первых этапах вирусного заражения могут блокировать вирусную информационную РНК в инфицированной клетке и препятствовать репродукции вирусов. Далее интерфероны способны активировать естественные цитотоксические клетки (ЕЦК) и цитотоксические Т-лимфоциты [4]. По мнению авторов, механизм антивирусной защиты состоит из таких последовательных механизмов:
— внутриклеточная ингибиция ранними интерферонами репродукции вирусов;
— удаление с помощью ЕЦК и Т-лимфоцитов инфицированных клеток;
— приобретение здоровыми клетками, которые находятся возле очага заражения, резистентности к инфицированию за счет ранних интерферонов;
— привлечение в очаг заражения макрофагов и лейкоцитов и активация их функциональной активности.

Цель работы — исследовать in vitro антивирусные свойства препарата Септолете плюс, его способность усиливать продукцию интерферонов и деструктивные свойства тканевых и кровяных естественных цитотоксических клеток.

Материал и методы исследования

Исследования in vitro проведены на клетках небных миндалин и периферической крови 12 больных хроническим тонзиллитом в возрасте 7–19 лет. Этим больным по показаниям проведена тонзиллэктомия. Клеточный материал получен из ткани миндалин и крови в соответствии с рекомендациями О.Ф. Мельникова и И.П. Кайдашева [7, 10]. Культивирование клеток проводили в питательной среде RPMI-1640 с добавками (L-глютамин, эмбриональная телячья сыворотка 5%, гентамицин 40 мкг/мл) в течение 18 часов для определения уровня цитолиза и в течение 24 часов — для определения интерферонопродукции с различными концентрациями препарата: 1 и 2. Контролем служили образцы культивируемых клеток крови и миндалин без препарата, в которых определяли исходный уровень активности и через 24 часа культивирования. Разведение препарата Септолете плюс 1 соответствовало добавлению к клеткам 0,1 мл водно-солевого экстракта, содержащего 1 измельченную таблетку препарата в 5 мл раствора Хэнкса и стерилизованного пропусканием через фильтр типа Millipore. Разведение 2 соответствовало 0,01 мл исходной концентрации. После 18-часового культивирования в опытных и контрольных образцах определяли цитолитическую активность клеток в отношении эритроцитов цыплят по спектрофотометрическому методу (анализатор Stat Fax 2100, США), описанному О.Ф. Мельниковым и Т.А. Заяц [11]. В надосадочной жидкости после суточного культивирования клеток определяли содержание a - и g -интерферонов иммуноферментным методом с помощью набора реактивов ООО «Протеиновый контур» (С п б., РФ) и иммуноферментного анализатора Stat Fax 2100 (США). Кроме того, для проверки предположения о возможной потенцирующей интерфероно­образование способности препарата в отдельные пробы с указанными концентрациями препарата добавляли индуктор интерфероногенеза — ридостин по 0,1 мл. Все пробы выполнялись в дублирующем исполнении. Материалы статистически обработаны с применением метода углового преобразования ( j ) по Фишеру [1].

Результаты исследований и их обсуждение

В ходе исследования установлено, что препарат Септолете плюс достоверно усиливал образование ранних ( a ) интерферонов в культуре как клеток миндалин, так и клеток крови и обладал потенцирующим действием при добавлении ридостина (табл. 1). На продукцию позднего, иммунного интерферона ( g ) как клетками небных миндалин, так и клетками крови препарат влияния не оказывал (рис. 1). Это обстоятельство определяет исключительную целесообразность применения Септолете плюс на ранних этапах инфекционного вирусного процесса, т.к. во время рассасывания в ротовой полости препарат контактирует с поверхностью небных миндалин или диффузными лимфоидными фолликулами и может активировать в них продукцию a -интерферона.

Что касается влияния препарата на цитолитическую активность клеток крови и небных миндалин, то достоверного усиления этой активности выявлено не было (табл. 2), хотя вектор отклонений при добавлении различных концентраций препарата был одинаковым в сторону усиления деструктивной способности клеток (30–89 % от исходной величины) при использовании Септолете плюс в 9 из 12 наблюдений.

Известно, что активация функции ЕЦК связана с влиянием системы интерферона и других цитокинов [13] и до известной степени определяет противовирусный потенциал препарата [3, 4, 9]. Исходя из того, что препарат способен активировать синтез ранних интерферонов, играющих важную роль на начальных этапах инфекционного процесса [12], можно считать целесообразным применение препарата Септолете плюс на начальных стадиях вирусной инфекции.

Выводы

1. Раствор препарата Септолете плюс в условиях культивирования с клетками небных миндалин или периферической крови активирует синтез a -интерферона.

2. Препарат Септолете плюс способен усиливать действие индуктора g -интерферона — ридостина в условиях in vitro .

3. Не выявлено существенных изменений в продукции позднего интерферона ( g ) в культуре клеток крови и миндалин под действием препарата Септолете плюс.

4. Препарат Септолете плюс не угнетал активности естественных цитотоксических клеток крови и миндалин in vitro и имел вектор изменений в сторону стимуляции деструктивной активности мононуклеаров.

5. Препарат Септолете плюс может применяться при массовых вирусных заболеваниях верхних дыхательных путей.