Мобильная версия

Журнал «Здоровье ребенка» 3 (71) 2016

Антиоксидантная система респираторного тракта Антиоксидантные эффекторы в надэпителиальном и экстрацеллюлярном пространстве (часть 1)

Авторы: Абатуров А.Е. - ГУ «Днепропетровская медицинская академия Министерства здравоохранения Украины», г. Днепр, Украина; Волосовец А.П. - Национальный медицинский университет им. А.А. Богомольца, г. Киев, Украина; Худяков А.Е. - ГУ «Днепропетровская медицинская академия Министерства здравоохранения Украины», г. Днепр, Украина

Рубрики: Педиатрия/Неонатология

Разделы: Справочник специалиста

В огляді літератури викладені сучасні дані щодо антиоксидантної системи респіраторного тракту. Показана локалізація компонентів і функціонування ферментної ланки антиоксидантної системи в респіраторному тракті. Викладена характеристика протеїнового складу рідини бронхоальвеолярного лаважу. Представлено зміни вмісту різних протеїнів у рідині бронхоальвеолярного лаважу після впливу алергена у хворих на бронхіальну астму. Показано функції й локалізацію неферментних біоантиоксидантів бронхоальвеолярного секрету. Докладно розглянуті характеристика, індукція синтезу й фізіологічна роль у респіраторному тракті антиоксидантного ферменту бронхоальвеолярного секрету — екстрацелюлярної супероксиддисмутази.

В обзоре литературы изложены современные данные об антиоксидантной системе респираторного тракта. Показаны локализация компонентов и функционирование ферментного звена антиоксидантной системы в респираторном тракте. Дана характеристика протеинового состава жидкости бронхоальвеолярного лаважа. Представлено изменение содержания различных протеинов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа после воздействия аллергеном у больных бронхиальной астмой. Показаны функции и локализация неферментных биоантиоксидантов бронхоальвеолярного секрета. Подробно рассмотрены характеристика, индукция синтеза и физиологическая роль в респираторном тракте антиоксидантного фермента бронхоальвеолярного секрета — экстрацеллюлярной супероксиддисмутазы.

The review of literature presents the current data about the antioxidant system of the respiratory tract. The localization of the components and functioning of the enzyme link of antioxidant defense in the respiratory tract are described. The protein content of the bronchoalveolar lavage is characterized. The changes in the content of various proteins in the bronchoalveolar lavage fluid after exposure to an allergen in patients with bronchial asthma are presented. There were shown the function and localization of non-enzymatic bioantioxidants of lung fluid. The characteristics, synthesis induction and physiological role in the respiratory tract of the antioxidant enzyme of lung fluid — extracellular superoxide dismutase were considered in detail.

Ключевые слова

антиоксидантна система, респіраторний тракт, антиоксидантні ефектори.

антиоксидантная система, респираторный тракт, антиоксидантные эффекторы.

antioxidant system, respiratory tract, antioxidant effectors.

Статья опубликована на с. 161-171

Введение

Активированные кислородсодержащие метаболиты (АКМ) и активированные азотсодержащие метаболиты (ААМ) играют важную роль как в защите респираторного тракта от инфекционных агентов, так и в регуляции ряда физиологических функций, но избыточная их продукция может привести к деструкции клеток и ткани респираторного тракта. АКМ и ААК инактивируются функционально-активными компонентами антиоксидантной системы респираторного тракта [3, 7, 27].

Среди группы биоантиоксидантов различают антиокислители неферментативного действия (жирорастворимые — токоферол, полифенолы, убихинол, тканевые липиды, витамины К, А; водорастворимые — аскорбиновая кислота, мочевина, глутатион, цистеин, никотинамид, бензойная кислота и другие) и антиоксидантные ферменты [2].

Основными ферментами антиоксидантной системы респираторного тракта являются супероксиддисмутазы (SOD — Cu/ZnSOD, MnSOD, ECSOD — superoxide dismutase, КФ 1.15.1.1), дисмутирующие супероксидный анион-радикал; каталаза (CAT — catalase, КФ 1.11.1.6), разрушающая перекись водорода; глутатионпероксидаза (GPX — glutatione peroxidase, КФ 1.11.1.9), инактивирующая перекиси липидов, а также глутатионредуктаза (GR — glutathione reductase, КФ 1.6.4.2), глутатионтрансфераза (GST — glutathione transferase, КФ 2.5.1.18), UDP-глукуронилтрансфераза (UGT — UDP-glucuronyl transferase), системы тиоредоксина, глутаредоксинов, пероксиредоксинов, фосфолипид-гидропероксид-глутатионпероксидаза, антиоксидантный фактор с опосредованным действием — APEX нуклеаза-1 или фактор окислительно-восстановительного потенциала (APEX nuclease (multifunctional DNA repair enzyme) 1/Ref-1) и другие [5, 11, 13, 15, 29]. Для бронхоальвеолярного секрета и различных клеток органов дыхания характерен свой определенный набор компонентов антиоксидантной системы (табл. 1).

Супероксиддисмутазы, каталаза, глутатионпероксидазы и пероксиредоксины непосредственно инактивируют АКМ. Такие антиоксидантные ферменты, как глутатионредуктазы, глутатионтрансферазы, тиоредоксинредуктазы, сульфиредоксин, хиноноксидоредуктазы, глюкуронилтрансферазы, инактивируют преимущественно вторичные реактивные метаболиты (хиноны, эпоксиды, альдегиды и пероксиды) (рис. 1).

Экспериментальные данные свидетельствуют о выраженной протекторной роли антиоксидантных ферментов в органах дыхания, которая не ограничивается антиокислительной деятельностью [30].

Антиоксидантные эффекторы в надэпителиальном и экстрацеллюлярном пространстве

Бронхоальвеолярный секрет, покрывающий всю поверхность трахеобронхиального дерева и альвеол и выступающий в роли ключевого барьера эпителиоцитов респираторного тракта, представляет собой жидкость с очень сложным составом клеток и биологически активных веществ, которые попадают в секрет из системы циркулирующей крови или секретируются эпителиоцитами и провоспалительными клетками (рис. 2) [17, 18, 21, 35].

Протеиновый состав и содержание отдельных компонентов бронхоальвеолярного секрета быстро изменяются в ответ на внешние раздражители. В качестве демонстрации глобальности процессов, происходящих в бронхоальвеолярном секрете при развитии заболеваний, приводим пример изменений содержания различных протеинов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа респираторного тракта у больных бронхиальной астмой после триггерного раздражения аллергеном (табл. 2).

Неферментные биоантиоксиданты бронхоальвеолярного секрета

Около 2 % протеинов от общего белкового пула бронхоальвеолярного секрета участвуют в антиоксидантной защите органов дыхания. В жидкости бронхоальвеолярного лаважа респираторного тракта идентифицировано большое количество различных биологических неферментных антиоксидантов, в том числе муцин, трансферрин, биофлавоноиды; витамины (токоферол, аскорбинат, ретинол, рибофлавин, никотиновая кислота); ионы металлов (селена, меди, цинка, марганца); аминокислоты (метионин, цистеин, триптофан, тирозин, фенилаланин, гистидин, пролин, билирубин, глутатион (в частности, концентрация восстановленного глутатиона в надэпителиальной жидкости в 100 раз выше, чем в сыворотке крови) (табл. 3).

По механизму действия биоантиоксиданты могут быть классифицированы на следующие группы:

1) классические антиоксиданты (обрывающие цепь агенты);

2) ловушки инициаторов свободнорадикальных реакций;

3) хелаторы (железосвязывающие агенты);

4) кофакторы и низкомолекулярные компоненты защитных антиокислительных ферментов и их предшественники.

Неферментные биоантиоксиданты оказывают свое действие не только в экстрацеллюлярном пространстве [1, 5, 7–9, 16].

Антиоксидантные ферменты бронхоальвеолярного секрета

Основными антиоксидантными ферментами, которые функционируют в надэпителиальном пространстве респираторного тракта, являются лактопероксидаза, экстрацеллюлярная супероксиддисмутаза, компоненты глутатионовой, глутаредоксиновой и пероксиредоксиновой систем. Однако исключительно в бронхиальном секрете функционирует лактопероксидаза, катализирующая Н2О2-зависимое окисление галогенидов и тиоцианатов, а в бронхиальном секрете и внеклеточном пространстве ткани легкого — экстрацеллюлярная супероксиддисмутаза, которая инактивирует супероксид-анион-радикал.

Экстрацеллюлярная супероксиддисмутаза

Несмотря на то, что относительное содержание экстрацеллюлярной супероксиддисмутазы составляет всего 5 % от суммарного количества всех трех форм супероксиддисмутаз, она является чрезвычайно важным антиоксидантным компонентом респираторного тракта. Особая роль ECSOD в защите респираторного тракта от действия АКМ была подтверждена во многих экспериментах и клинических научных работах [32, 23]. Впервые ECSOD была идентифицирована в 1982 году Stefan L. Marklund как гидрофобный гликопротеин с молекулярной массой 135 000 кДа [24].

Краткая характеристика экстрацеллюлярной супероксиддисмутазы

Молекула ECSOD представляет собой последовательность из 222 аминокислотных остатков и содержит один атом меди и один атом цинка, присутствие которых необходимо для осуществления ферментативной деятельности. Протеин ECSOD представляет собой гликопротеин, который находится преимущественно в гомотетрамерной форме. Гомотетрамеры состоят из двух димеров, связанных между собой дисульфидными связями между цистеиновыми остатками С-терминальных регионов. Молекула ECSOD содержит три домена: гидрофобный N-терминальный домен, участвующий в димеризации, центральный домен, содержащий активный каталитический центр, и гидрофильный С-терминальный домен, в котором расположена последовательность из девяти положительно заряженных аминокислотных остатков (шести Arg и трех Lys — гепарин/матрикс-связывающий домен), в связи с чем способен связываться с протеогликанами наружной поверхности мембраны клетки и экстрацеллюлярного матрикса (рис. 3) [6, 13, 28, 32]. Примечательно, что гепарин/матрикс-связывающий домен высокочувствителен к действию протеолитических ферментов. Поэтому протеазы могут функционировать как регуляторы уровня представительства ECSOD на поверхности мембраны клеток и в экстрацеллюлярном матриксе. ECSOD является ферментом с очень стабильной и устойчивой к действию высокой температуры, рН > 10 и концентрациям мочевины структурой. Ингибирующее действие на активность ECSOD оказывают перекись водорода, цианаты и диэтилдитиокарбамат [25]. Различают три изоформы ECSOD — A, B и C. В организме человека синтезируется преимущественно фермент ECSOD С, обладающий высоким сродством к гепарину и локализующийся в тканях организма. В биологических жидкостях преимущественно находятся A и B формы ECSOD [33].

Основным местом локализации ECSOD является внешняя поверхность клеточных мембран и экстрацеллюлярное пространство, в данных регионах ее концентрация превышает содержание в сыворотке крови в 20 раз. Также ECSOD определяется в биологических жидкостях: сыворотке крови, лимфе, ликворе, синовиальной жидкости и бронхиальном секрете. В органах дыхания, кровеносных сосудах и плаценте находится большая часть всего ECSOD, содержащегося в организме человека. Экспрессия мРНК ECSOD носит тканеспецифический характер: высокая экспрессия наблюдается в ткани легких, сердца, плаценты и поджелудочной железы, а низкая экспрессия характерна для ткани головного мозга. В респираторном тракте ECSOD экспрессируется только в определенных клетках: бронхиальных эпителиоцитах, альвеолоцитах II типа, альвеолярных макрофагах, интерстициальных фибробластах, эндотелиоцитах кровеносных сосудов (табл. 4) [25, 32]. Необходимо отметить, что ECSOD может находиться и внутри некоторых фагоцитирующих клеток, в частности в нейтрофилах и макрофагах [22].

Индукция синтеза экстрацеллюлярной супероксиддисмутазы и каталитический цикл

Активность экспрессии гена ECSOD индуцируется многими факторами. Показано, что альвеолоциты II типа реагируют усилением экспрессии гена ECSOD в ответ на действие IFN-γ и TNF-α. По всей вероятности, возбуждение экспрессии гена опосредовано фактором транскрипции NF-κB, так как на промоторе гена ECSOD располагается NF-κВ-связывающийся элемент. В 5'-нетранслируемом регионе гена ECSOD содержатся и другие регуляторные элементы, в том числе элемент арилуглеводородного рецептора, элемент антиоксидантного ответа (АРЕ), глюкокортикоид-отвечающий элемент, мотив AP-1 [33]. Экспрессия мРНК ECSOD в гладкомышечных клетках сосудов увеличивается под воздействием вазоактивных биоагентов (гистамина, вазопрессина, окситоцина, эндотелина-1, ангиотензина II и серотонина), гормонов (фоллитропина, эстрогена), цАМФ, оксидантов и других [32]. В то время как TGF-β и IL-1 ингибируют экспрессию ECSOD [20].

Экстрацеллюлярная супероксиддисмутаза дисмутирует супероксид-анион-радикал во внеклеточном пространстве, на поверхности клеточных мембран и в биологических жидкостях (каталитический цикл представлен в подразделе супероксиддисмутазы). ECSOD также проявляет пероксидазную активность. ECSOD катализирует реакцию, в которой в качестве субстрата используется H2O2, образуя промежуточную форму ECSOD Cu-OH–, которая в последующем преобразуется в ECSOD Cu-ОН. Последняя взаимодействует с анионом HCO3–, окисляя его до CO3–, и возвращается в активную форму. Оксидант CO3– может вступать в реакцию с другими соединениями (рис. 4). Поскольку каталаза и глутатионпероксидазы, обусловливающие деградацию H2O2, преимущественно расположены внутри клетки, в экстрацеллюлярном пространстве в процессе инактивации H2O2 ключевую роль играют ECSOD и LPO [32].

Физиологическая роль экстрацеллюлярной супероксиддисмутазы в респираторном тракте

ECSOD, модулируя действие АКМ, регулирует процесс воспаления и развитие фиброза легких. Помимо нейтрализации АКМ, фермент ECSOD также защищает эндотелий сосудов и клетки интерстициальной ткани легкого от деструктивного действия NO [28].

Развитие воспалительного процесса в респираторном тракте сопровождается снижением уровня представительства ECSOD в ткани, что связывают с притоком нейтрофилов, протеазы которых, отщепляя С-терминальный регион молекулы ECSOD, способствуют ее отрыву от поверхности мембран клеток, высвобождению из экстрацеллюлярного матрикса и выходу в бронхоальвеолярную жидкость [12, 14]. Протеин ECSOD, специфически связываясь своим гепарин/матрикс-связывающим доменом c коллагеном I, IV типов, гепарансульфатами, гиалуроновой кислотой, защищает их от разрушительного действия АКМ. Учитывая, что фрагменты коллагена I, IV типов являются мощными хемоаттрактантами провоспалительных клеток, предупреждение деградации коллагеновых молекул может лежать в основе противовоспалительного действия ECSOD [13]. Показано, что присутствие ECSOD в бронхоальвеолярном секрете снижает выраженность воспалительного процесса. Снижение содержания ECSOD является существенным фактором, который стимулирует воспалительную реакцию в респираторном тракте [23]. Экспериментальная пневмония, вызванная кишечной палочкой, у мышей с нокаутом гена ECSOD протекала с достоверно более выраженным поражением легких, чем у диких мышей. Также ECSOD, содействуя фагоцитозу, способствует элиминации бактерий и ограничению очага воспаления легких [12].

Экстрацеллюлярная супероксиддисмутаза, контролируя уровни биодоступности внеклеточного супероксид-анион-радикала, оксида азота и модулируя активность эндотелиоцитов, играет важную роль в регуляции артериального давления [31].

Список литературы

1. Воскресенский О.Н. Биооксиданты — облигатные факторы питания / О.Н. Воскресенский, В.Н. Бобырев // Вопр. мед. химии. — 1992. — № 4. — С. 21.

2. Габитова Д.М. Антиоксидантная защитная система организма / Д.М. Габитова, В.О. Рыжикова, М.А. Рыжикова // Башкирский химический журнал. — 2006. — Т. 13, № 2. — С. 94.

3. Калинина Е.В. Участие тио-, перокси- и глутаредоксинов в клеточных редокс-зависимых процессах / Е.В. Калинина, Н.Н. Чернов, А.Н. Саприн // Успехи биологической химии. — 2008. — Т. 48. — С. 319-331.

4. Активные формы кислорода в живых системах / А. Магеррамов, И.А. Алиев, У.Ф. Аскерова и др. // Baki Universitetinin Xǝbǝrlǝri. — 2009. — Т. 4. — С. 41-52.

5. Analysis of glutathione: implication in redox and detoxification / A. Pastore, G. Federici, E. Bertini, F. Piemonte // Clin. Chim. Acta. — 2003. — Vol. 333. — P. 19-39. PMID: 12809732.

6. Altered expression of extracellular superoxide dismutase in mouse lung after bleomycin treatment / C.L. Fattman, C.T. Chu, S.M. Kulich et al. // Free Radic. Biol. Med. — 2001. — Vol. 31, № 10. — P. 1198-1207. PMID: 11705698.

7. Comhair S.A. Antioxidant responses to oxidant-mediated lung diseases / S.A. Comhair, S.C. Erzurum // Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. — 2002. — Vol. 283, № 2. — P. L246-L255. PMID: 12114185.

8. Deplancke B. Redox control of the trans-sulfuration and glutathione biosynthesis pathways / B. Deplancke, H.R. Gaskins // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. — 2002. — Vol. 5. — P. 85-92. PMID: 11790955.

9. Depletion of glutathione and ascorbate in lung lining fluid by respirable fibres / D.M. Brown, P.H. Beswick, K.S. Bell, K. Donaldson // Ann. Occup. Hyg. — 2000. — Vol. 44. — P. 101-108. PMID: 10717261.

10. Differential proteomic analysis of bronchoalveolar lavage fluid in asthmatics following segmental antigen challenge/ J. Wu, M. Kobayashi, E.A. Sousa et al. // Mol. Cell. Proteomics. — 2005. — Vol. 4, № 9. — P. 1251-1264. PMID: 15951573.

11. Extracellular glutathione peroxidase induction in asthmatic lungs: evidence for redox regulation of expression in human airway epithelial cells / S.A. Comhair, P.R. Bhathena, C. Farver et al. // FASEB J. — 2001. — Vol. 15. — P. 70-78. PMID: 11149894.

12. Extracellular superoxide dismutase in macrophages augments bacterial killing by promoting phagocytosis / M.L. Manni, L.P. Tomai, C.A. Norris et al. // Am. J. Pathol. — 2011. — Vol. 178, № 6. — P. 2752-2759. doi: 10.1016/j.ajpath.2011.02.007.

13. Extracellular superoxide dismutase in pulmonary fibrosis / F. Gao, V.L. Kinnula, M. Myllärniemi, T.D. Oury // Antioxid. Redox. Signal. — 2008. — Vol. 10, № 2. — P. 343-354. PMID: 17999630.

14. Fattman C.L. Extracellular superoxide dismutase in biology and medicine / C.L. Fattman, L.M. Schaefer, T.D. Oury // Free Radic. Biol. Med. — 2003. — Vol. 35, № 3. — P. 236-256. PMID: 12885586.

15. Haddad J.J. O2-evoked regulation of HIF‑1α and NF-κB in perinatal lung epithelium requires glutathione biosynthesis / J.J. Haddad, S. Land // Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. — 2000. — Vol. 278. — P. L492-L503. PMID: 10710521.

16. Haddad J.J. Thiol regulation of pro-inflammatory cytokines reveals a novel immunopharmacological potential of glutathione in the alveolar epithelium / J.J. Haddad, B. Safieh-Garabedian, N.E. Saadé, S.C. Land // J. Pharmacol. Exp. Therap. — 2001. — Vol. 296. — P. 996-1005. PMID: 11181934.

17. Hu S. Human body fluid proteome analysis / S. Hu, J.A. Loo, D.T. Wong // Proteomics. — 2006. — Vol. 6, № 23. — P. 6326-6353. PMID: 17083142.

18. Human bronchoalveolar lavage: biofluid analysis with special emphasis on sample preparation / A. Plymoth, C.G. Löfdahl, A. Ekberg-Jansson et al. / Proteomics. — 2003. — Vol. 3, № 6. — P. 962-972. PMID: 12833521.

19. Kinnula V.L. Focus on antioxidant enzymes and antioxidant strategies in smoking related airway diseases // Thorax. — 2005. — Vol. 60, № 8. — P. 693-700. PMID: 16061713.

20. Kinnula V.L. Superoxide dismutases in the lung and human lung diseases / V.L. Kinnula, J.D. Crapo // Am. J. Respir. Crit. Care Med. — 2003. — Vol. 167, № 12. — P. 1600-1619. PMID: 12796054.

21. Leroy B. Sample preparation of bronchoalveolar lavage fluid / B. Leroy, P. Falmagne, R. Wattiez // Methods Mol. Biol. — 2008. — Vol. 425. — P. 67-75. doi: 10.1007/978-1-60327-210-0_6.

22. Localization of extracellular superoxide dismutase in rat lung: neutrophils and macrophages as carriers of the enzyme / B. Loenders, E. Van Mechelen, S. Nicolaï et al. // Free Radic. Biol. Med. — 1998. — Vol. 24, № 7-8. — P. 1097-1106. PMID: 9626563.

23. Loss of extracellular superoxide dismutase leads to acute lung damage in the presence of ambient air: a potential mechanism underlying adult respiratory distress syndrome / M.C. Gongora, H.E. Lob, U. Landmesser et al. // Am. J. Pathol. — 2008. — Vol. 173, № 4. — P. 915-926. doi: 10.2353/ajpath.2008.080119. Epub 2008 Sep 11.

24. Marklund S.L. Human copper-containing superoxide dismutase of high molecular weight // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1982. — Vol. 79, № 24. — P. 7634-7638. PMID: 6961438.

25. Marklund S.L. Extracellular superoxide dismutase in human tissues and human cell lines // J. Clin. Invest. — 1984. — Vol. 74, № 4. — P. 1398-1403. PMID: 6541229.

26. Miao L. Regulation of superoxide dismutase genes: implications in disease / L. Miao, D.K. St Clair // Free Radic. Biol. Med. — 2009. — Vol. 47, № 4. — P. 344-356. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2009.05.018. Epub 2009 May 25.

27. NF-κB protects lung epithelium against hyperoxia-induced nonapoptotic cell death-oncosis / W.R. Franek, D.M. Morrow, H. Zhu et al. // Free Radic. Biol. Med. — 2004. — Vol. 37. — P. 1670-1679. PMID: 15477018.

28. Nozik-Grayck E. Extracellular superoxide dismutase / E. Nozik-Grayck, H.B. Suliman, C.A. Piantadosi // Int. J. Biochem. Cell. Biol. — 2005. — Vol. 37, № 12. — P. 2466-2471. PMID: 16087389.

29. Oxygen sensing and redox signaling: the role of thioredoxin in embryonic development and cardiac diseases / M. Kobayashi-Miura, K. Shioji, Y. Hoshino et al. // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. — 2007. — Vol. 292, № 5. — P. H2040- H2050. PMID: 17293486.

30. Reddy S.P. The antioxidant response element and oxidative stress modifiers in airway diseases // Curr. Mol. Med. — 2008. — Vol. 8, № 5. — P. 376-383. PMID: 18691064.

31. Role of extracellular superoxide dismutasein hypertension / M.C. Gongora, Z. Qin, K. Laude et al. // Hypertension. — 2006. — Vol. 48. — P. 473-481. PMID: 16864745.

32. Skrzycki M. Zewnątrzkomórkowa dysmutaza ponadtlenkowa (EC-SOD) — budowa, właściwości i funkcje / M. Skrzycki, H. Czeczot // Postepy Hig. Med. Dosw. (Online). — 2004. — Vol. 58. — P. 301-311. PMID: 15280800

33. Superoxide dismutase 3, extracellular (SOD3) variants and lung function / K. Ganguly, M. Depner, C. Fattman et al. // Physiol. Genomics. — 2009. — Vol. 37, № 3. — P. 260-267. doi: 10.1152/physiolgenomics.90363.2008. Epub 2009 Mar 24.

34. The structure of human extracellular copper-zinc superoxide dismutase at 1.7 A resolution: insights into heparin and collagen bin-ding / S.V. Antonyuk, R.W. Strange, S.L. Marklund, S.S. Hasnain // J. Mol. Biol. — 2009. — Vol. 388, № 2. — P. 310-326. doi: 10.1016/j.jmb.2009.03.026. Epub 2009 Mar 14.

35. Wattiez R. Proteomics of bronchoalveolar lavage fluid / R. Wattiez, P. Falmagne // J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. — 2005. — Vol. 815, № 1-2. — P. 169-178. PMID: 15652807.